三斑海马蛋白质组学双向电泳技术的建立与优化

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期刊名称
中国实验方剂学杂志
作 者
王清蓉; 万德光; 国锦琳; 陈璐
作者单位
成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地
关键词
三斑海马  双向电泳  蛋白质组学  动物药  
论文摘要
目的:建立适于三斑海马干药材蛋白质组研究的双向电泳技术,为后期进行深入的中药材海马蛋白组学研究奠定基础。方法:对影响蛋白质双向电泳的几个关键环节——提取方法、裂解液、纯化方法、上样量进行优化,筛选最佳方法流程。结果:优化出的海马蛋白质提取方法为液氮研磨法,最佳蛋白质提取裂解液为7 mol·L-1尿素,2 mol·L-1硫脲,含4%Chaps,1 mmol·L-1PMSF,65 mmol·L-1DTT和0.2%Bio-Lyte,最佳蛋白质纯化方法为超滤+TCA丙酮沉淀两步纯化法,双向电泳最佳上样量为300μg。Image master 7.0软件对电泳图谱分析共检测出三斑海马蛋白质斑点236个,相对分子质量在14.497.4 k Da均有分布,分布差异不明显;蛋白质等电点主要分布在p H 49,其中以碱性蛋白质最为丰富。结论:利用上述方法所得的双向电泳图谱斑点清晰、分离均匀,图谱质量佳,该方法流程适合三斑海马药材蛋白质组学分析。该研究能为后期进行深入的海马蛋白质组学研究,筛选特征性蛋白质奠定基础。
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